原理
QIAgenes Expression Constructs针对35，000个人类ORFs 设计，将合成并完整测序的cDNA免费克隆至表达载体。根据密码子规则*和mRNA稳定性及其二级结构，对QIAgenes Expression Constructs E. coli 中编码蛋白的序列进行了优化，以实现人类基因在 E. coli 中高效表达。
* 由GENEART支持您所选择的基因
QIAgenes Expression Constructs E. coli 具备下列特性：
QIAgenes Expression Constructs E. coli 含有的试剂。N-末端His 标签经优化，可应用TAGZyme system去除。琥珀密码子确保在无细胞表达过程中应用EasyXpress Site-Specific Biotin Kit简单地进行C-末端生物素标记。
QIAgenes Expression Kit 提供的产品页中提供QIAgenes Expression Construct 的基本构架，详细图谱和序列信息可点击这里。
经优化的编码序列确保高效表达
真核蛋白在原核系统中表达的限制性因素在于细菌细胞和哺乳动物细胞密码子使用的区别。此外，mRNA二级结构可造成低效翻译和蛋白产量低。QIAgenes Expression Constructs 中人类蛋白的编码序列根据E. coli 密码子使用进行了优化，且没有序列重复和其他形成mRNA二级结构的因素，促进高效表达。
靶序列去除
在真核细胞中，糖蛋白和预期分泌的蛋白由核糖体配合内质网膜（ER）合成，这些类型的蛋白与一个含有N-末端的所谓信号序列/信号肽共同合成，后者由13-36个疏水集团构成。为在E. coli 系统中高效表达，必须去除该序列。 生产过程中，或从蛋白编码中去除NCBI数据库中的信号肽编码序列。这个通过编码序列与含有信号肽基因的成熟序列的长度区别体现出来。
流程
在数据库 GeneGlobe 中选择您的基因，加入您的购物车，等着接收可直接用于转化的载体DNA。无需文库筛查、PCR扩增、亚克隆、克隆筛查、测序及其他流程，操作简单（见流程图）。
Cell-free expression using QIAgenes Expression Constructs E. coli
QIAgenes Expression Constructs E. coli 与基于EasyXpress E. coli的无细胞表达试剂盒完全兼容，新型EasyXpress Protein Synthesis Kit（5次反应）提供快速经济的基因构架检测方法。
经优化的蛋白编码序列提高产量。将野生型和经优化的QIAgenes编码序列克隆至QIAgenes Expression Constructs中，应用基于E. coli的 EasyXpress cell-free expression kit同步表达，并使用Ni-NTA Superflow进行纯化。经天然裂解后可通过 SDS-PAGE 和使用 Penta·His Antibodies的western blotting以及化学荧光检测法显示表达水平。
表达蛋白纯化和检测
QIAgenes Expression Kits E. coli 包含Ni-NTA Spin Columns 和Penta·His Antibodies，可快速高效进行His-tagged靶蛋白一步法纯化和检测。标签序列进行了优化，不仅可促进E. coli 体系中的表达，也可提高应用TAGZyme system去除的效率。
Efficient His-tag removal. His-tagged TNFα was expressed in E. coli and purified using Ni-NTA Superflow. The His tag was removed by initial incubation with DAPase for 30 min after which His-tagged DAPase was removed by subtractive IMAC. M: markers; CL: cell lysate; FT: flow-through;
W: wash; E: eluate; DAPase: DAPase reaction; pG: pGAPase reaction.
翻译后修饰的蛋白合成
由于原核细胞缺乏翻译后修饰必需的酶和细胞器，在需要此类修饰的情况下必须在真核系统（哺乳动物或昆虫）中合成蛋白。QIAgenes Expression Constructs Insect/Mammalia 是序列经优化，可直接用于表达的质粒，含有昆虫或哺乳动物及无细胞表达系统中翻译后修饰真核蛋白表达所必需的所有因子（如昆虫和哺乳动物启动子）。
膜蛋白表达
虽然可以在E. coli中异源表达某些人类膜蛋白，经验证明这些蛋白在真核系统中表达成功的机率更高。因此我们推荐使用QIAgenes Expression Constructs Insect/Mammalia 表达膜蛋白，配合哺乳动物或昆虫体内表达系统或试剂盒 EasyXpress Insect Kit II。
应用
QIAgenes Expression Constructs E. coli 用于提高人类蛋白表达成功率和表达量，应用如下：
